马林　唐康来　周兵华　杨广华　陈万　穆米多　袁成松

　　目的:探讨不同机械牵伸条件对大鼠肌腱干细胞（tendon stem cells，TSCs）RhoA/ Rho相关蛋白激酶（Rho associated protein kinases，ROCK）分子表达的影响。

　　方法:取2～3月龄雄性SD大鼠（体重200～250 g）跟腱组织，采用酶消化法分离培养TSCs。取第2～3代细胞接种于微沟槽培养皿中，分别以牵伸应变量4%、8%（4%牵伸组、8%牵伸组），牵伸频率1 Hz，牵伸时间4 h/d进行机械牵伸，倒置相差显微镜下观察细胞生长情况；牵伸1、2、3 d后收集细胞，采用实时定量 PCR、Western blot检测RhoA、ROCK基因及蛋白表达情况，应用细胞计数试剂盒8检测牵伸后细胞增殖情况。以未牵伸的TSCs作为对照组。

　　结果:第2代TSCs形态呈鹅卵石样，聚集生长；接种于微沟槽培养皿后呈杂乱生长；牵伸后细胞贴壁良好，无脱落，并沿受力方向排列。各时间点TSCs中RhoA、ROCK基因相对表达量随牵伸应变量的增加呈递增趋势，组间比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。牵伸1 d时，4%、8%牵伸组与对照组相比RhoA、ROCK蛋白表达水平相似（P > 0.05）；2、3 d时，4%、8%牵伸组表达水平显著高于对照组，且随牵伸应变量增加呈递增趋势，组间比较差异均有统计学意义（P < 0.05）；各时间点，8%牵伸组细胞增殖显著低于4%牵伸组及对照组（P < 0.05）；4%牵伸组与对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。

　　结论:大鼠TSCs中RhoA、ROCK分子表达水平随牵伸应变量的增加而增加，RhoA/ROCK分子可能是TSCs机械牵伸后的重要效应分子。