李会杰   刘亚玲   井永敏   张英泽  王振昊   闫金成

摘　　要：目的 研究体外培养的Nfl＋／-小鼠破骨细胞合成、分泌骨桥蛋白（osteopontin，OPN）的能力，应用OPN中和抗体抑制破骨细胞分泌的OPN，测定破骨细胞功能，并与野生型破骨细胞比较，分析OPN在Nfl＋／-小鼠破骨细胞功能增强中的作用。方法 配对选取神经纤维瘤病基因野生型（Nf＋/＋）和杂合型（Nf＋／-）基因型小鼠，采集骨髓单个核细胞，体外培养破骨细胞，获取体外培养破骨细胞不同时期的上清液，做ELISA分析检测OPN浓度，并与Nfl＋／＋破骨细胞比较；在加入OPN中和抗体或等量PBS的条件下，测定体外培养的Nfl＋／-小鼠破骨细胞的形成数量，应用Transwell小室方法测定破骨细胞迁移功能，应用自然贴壁法测定破骨细胞黏附功能，应用骨片吸收法测定破骨细胞骨吸收功能，并进行数据分析。结果 在体外培养的Nfl＋／-小鼠破骨细胞上清液中，OPN含量比野生型小鼠破骨细胞上清液中含量明显增高，培养6d的破骨细胞上清液中OPN含量的差异更为明显。体外培养Nfl＋／-破骨细胞形成数量比Nfl＋／＋破骨细胞明显增多，破骨细胞的黏附功能、迁移功能以及骨吸收功能较Nfl＋／＋破骨细胞明显增强，差异有统计学意义；在培养时加入有活性的OPN中和抗体，可以抑制Nfl＋／-破骨细胞的形成，破骨细胞的黏附能力、迁移能力以及骨吸收功能均降低，恢复到野生型水平。结论 自分泌OPN在Nfl＋／-小鼠破骨细胞功能增强过程中发挥重要作用，OPN可能是治疗1型神经纤维瘤病骨质疏松的靶向治疗候选靶分子之一，其具体分子机制还需进一步研究。